怎样形成清晰的图像

　　在显微镜检查中，景深常被看做经验参数。在实际操作中，会根据数值孔径、分辨率和放大率之间的相关性确定该参数。为了获得最佳视觉效果，现代显微镜的调节设备在景深和分辨率之间实现了最佳平衡，这两个参数在理论上呈负相关。

　　人眼景深实际值

　　DIN/ISO标准将物体侧面的景深定义为“物体平面两侧空间的轴向深度，物在该深度范围内移动时没有可检测到的图像清晰度损失，且图像平面和物镜的位置保持不变”。

　　然而，该标准没有给出任何关于焦点虚化检测阈值的测量方法。Max Berek是首位就人眼景深发表文章的作者，早在1927年，他就已经将自己通过广泛实验获得的结果公布于世。Berek公式给出了人眼景深的实际值，至今仍在沿用。简化公式如下：

　　TVIS = n [λ/(2 × NA?) + 340 μm/(NA × MTOT VIS)]

　　TVIS：人眼景深

　　n：物体所处介质的折光率。如果物体移动，则将导致工作距离变化的介质折光率代入等式。

　　λ：所用光源的波长，如果是白光，λ = 0.55 μm

　　NA：物体侧面的数值孔径

　　MTOT VIS：显微镜的总视角放大率

　　如果在上述等式中，将总视角放大率替换为有效放大率（MTOT VIS=500至1000×NA），可以看出，采用一级近似值时，景深与数值孔径的平方成反比。

　　在放大率低时，缩小光圈（即减小数值孔径）可以显著延长景深。一般可用孔径光阑或共轭平面上的光阑来完成这一操作。但数值孔径越小，横向分辨率越低。

　　因此，问题在于如何根据物体结构找到分辨率和景深之间的最佳平衡点。借助高分辨率物镜（高NA）和可调孔径光阑，现代光学显微镜能够根据特定样品的要求灵活匹配光学器件。在立体显微镜中，考虑到三维结构中z维度的要求，通常需要作出一些妥协以获得更长景深。